藤茶止咳化痰作用的研究論文
藤茶俗稱端午茶、藤婆茶。野生藤茶廣泛分布在我省梵凈山地區(qū)，其味甘甜性涼，具有清熱解毒、抗菌消炎、鎮(zhèn)咳祛痰等功效，民間常常用來治療感冒發(fā)熱等疾病的。目前為止還沒有看見有和它相關(guān)的止咳、化痰藥理方面的研究報(bào)道。因此筆者對(duì)藤茶進(jìn)行止咳、化痰作用的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究，為藤茶的綜合利用提供科學(xué)依據(jù)。
1材料
1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
昆明種小鼠，SPF級(jí)，雌雄各半，選用體重18～22g的健康動(dòng)物，購自中山大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證號(hào):粵檢證字SCXK(粵)-2009-0070。
1.2樣品來源與配制
1.2.1藤茶不同方法提取物配制有藤茶水提、石油醚提取、氯仿提取、乙酸乙酯提取4個(gè)成分組。每組均折合生藥含量350mg/ml，給藥劑量相當(dāng)于生藥3500mg/kg體重。
1.2.2藤茶水提成分不同劑量組配制藤茶水提成分高劑量組為直接給藥，折合生藥含量350mg/ml，給藥劑量相當(dāng)于生藥3500mg/kg體重;中劑量組為藤茶水提物加生理鹽水，按1∶2稀釋后給藥，折合生藥含量117mg/ml，給藥劑量相當(dāng)于生藥1167mg/kg體重;低劑量組為藤茶水提物加生理鹽水，按1∶8稀釋，稀釋后給藥，折合生藥含量38.9mg/ml，給藥劑量相當(dāng)于生藥389mg/kg體重。
1.2.3其它樣品配制生理鹽水(氯化鈉注射液)，NaCl含量0.9%;美沙芬陽性對(duì)照，含量為15mg/片，取2片溶解于20毫升生理鹽水中，制成懸液，其濃度為3mg/ml，劑量為30mg/kg體重;痰咳凈陽性對(duì)照，劑量為200mg/kg體重;陰性對(duì)照均采用蒸餾水。
2方法
2.1濃氨水噴霧法研究止咳藥效
取昆明種小鼠120只，隨機(jī)分為8組，每組15只。設(shè)陰性(蒸餾水)對(duì)照，陽性對(duì)照(美沙芬)和藤茶石油醚提取成分組、氯仿提取成分組、乙酸乙酯提取成分組，水提取成分組，其中水提取成分組細(xì)分為高、中、低3個(gè)劑量組。
實(shí)驗(yàn)前小鼠禁食不禁水12h，然后各組小鼠按0.3ml/20g體重灌胃給藥，其中陰性對(duì)照組給等體積蒸餾水。給藥后1h，小鼠接受噴霧，按一定時(shí)間噴入濃氨水氣霧，結(jié)束，立即取出小鼠，觀察有無咳嗽反應(yīng)。觀察1min內(nèi)咳嗽次數(shù)，若1min內(nèi)出現(xiàn)3次以上典型咳嗽動(dòng)作(腹肌收縮或縮胸，同時(shí)張大嘴，有時(shí)可有咳聲)者，算作“有咳嗽”。否則算作“無咳嗽”。以停止接觸氨水刺激后1min內(nèi)咳嗽次數(shù)大于或等于3次判為陽性，個(gè)別動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)死亡或休克，判為咳嗽陽性。用序貫法(上下法)求出引起半數(shù)小鼠咳嗽的噴霧時(shí)間(EDT50)。計(jì)算值，若值大于130%，說明有的止咳作用。若值大于150%，說明有顯著的止咳作用(陳奇，2006;羅霄山等，2004;羅文敏等，2011)。
EDT50=log-1c/n(式中n為動(dòng)物數(shù)，c為rx值的總和，r為每劑量組的動(dòng)物數(shù)，x為劑量(即噴霧時(shí)間)的對(duì)數(shù)。)=給藥組的.EDT50/對(duì)照組的EDT50×100%
2.2對(duì)小鼠氣管酚紅排泌量的影響
標(biāo)準(zhǔn)酚紅曲線的繪制:使用分析天平準(zhǔn)確稱取一定量的酚紅，用5%碳酸氫鈉溶解，配成每1ml含12.5μg，然后順次進(jìn)行倍比稀釋成每毫升含酚紅6.25μg、3.125μg、1.5625μg、0.7813μg、0.3906μg、0.1953μg、0.0977μg、0.0488μg，用分光光度計(jì)測(cè)OD值。以酚紅濃度為縱坐標(biāo)，OD值為橫坐標(biāo)，根據(jù)酚紅濃度和OD值計(jì)算出回歸方程。根據(jù)回歸方程計(jì)算出小鼠酚紅的排泄量(陳奇，2006)。
取昆明種小鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只。
設(shè)陰性(蒸餾水)對(duì)照組、陽性(痰咳凈)對(duì)照藥物組、藤茶水提取物低劑量組、中劑量組、高劑量組。實(shí)驗(yàn)前小鼠禁食不禁水12h，然后各組小鼠按0.3ml/20g體重灌胃給藥，其中陰性對(duì)照組給等體積蒸餾水。給藥后30min，腹腔注射5%酚紅生理鹽水溶液0.2ml/20g，注射后30min，脫頸椎處死小鼠，剪取氣管，將各氣管段放入預(yù)先盛有1.5ml的5%NaHCO3溶液試管中，后置于渦流混合器上震蕩2min，使氣管段中的酚紅完全釋放，檢測(cè)前試管中加入1molNaOH溶液0.1ml，離心(3000rpm，5min)，后將試管中溶液于721型分光光度計(jì)546nm處測(cè)OD值，根據(jù)回歸方程計(jì)算出酚紅排泌量。
計(jì)算公式:y=0.119x-0.0059x為OD值，y為氣管酚紅排泌量(陳奇，2006;羅霄山等，2004;羅文敏等，2011)。
2.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)
數(shù)據(jù)以“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
3結(jié)果
3.1藤茶對(duì)濃氨水致咳小鼠的影響
藤茶水提物、氯仿提取物、乙酸乙酯提取物和石油醚提取物，灌胃給藥對(duì)刺激小鼠引起咳嗽的耐受時(shí)間與陰性對(duì)照組比較，均有顯著延長(zhǎng)，在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著差異。其中藤茶水提取物的耐受時(shí)間最長(zhǎng)，其R值達(dá)到210.38%，陽性(美沙芬)對(duì)照組的值為225.42%，可見其療效與陽性對(duì)照組相當(dāng)，都達(dá)到顯效水平。
鑒于藤茶水提取物止咳作用顯著，又進(jìn)一步研究藤茶水提物不同劑量組的止咳效果。結(jié)果可見，藤茶高、中劑量組值分別達(dá)到210.38%和173.78%都達(dá)到顯效水平，低劑量組值為137.09%達(dá)到有效水平。綜上，可見藤茶具有良好的止咳作用。
3.2藤茶對(duì)小鼠氣管酚紅排泌量的影響
由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，藤茶水提取物不同劑量灌胃給藥對(duì)小鼠支氣管分泌物量與陰性對(duì)照組比較，均有顯著增加，在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著差異。其中藤茶水提取物高、中劑量組氣管酚紅排泌量分別達(dá)到4.647±0.903μg/ml和5.424±1.465μg/ml，均高于陽性(痰咳凈)對(duì)照組的3.672±0.894μg/ml，說明藤茶水提物高、中劑量組化痰效果優(yōu)于陽性藥物痰咳凈。綜上所述，說明藤茶具有很好的化痰效果。
4結(jié)論
1)藤茶不同方法提取物濃氨水致咳小鼠的實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明藤茶水提物、氯仿提取物、乙酸乙酯提取物和石油醚提取物均顯示出一定的止咳作用，其中藤茶水提物的止咳效果最佳;2)藤茶水提物不同劑量組進(jìn)行濃氨水致咳小鼠的實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明藤茶水提物高、中劑量組顯示出接近陽性(美沙芬)對(duì)照組的止咳效果;3)藤茶水提物不同劑量組進(jìn)行小鼠氣管酚紅排泌量實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明藤茶水提物高、中劑量組顯示出高于陽性(痰咳凈)對(duì)照組的化痰效果。
綜上所述，藤茶具有顯著止咳化痰的作用，這為藤茶的綜合開發(fā)利用提供了科學(xué)依據(jù)。
[參考文獻(xiàn)]
陳奇，2006.中藥藥理研究方法學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社:625-626.
羅霄山，許家騮，張誠光，2004.咳喘樂顆粒鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中藥材，27(7):520-523.
羅文敏，尹軍強(qiáng)，鄭先玉，2011.桂龍咳喘寧片止咳化痰平喘藥效學(xué)的研究[J].時(shí)針國醫(yī)國藥，22(10):2464-2465.
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